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아미노산과 면역 침전 문제를 어떻게 해결합니까?

단백질이 면역 침전 솔루션이라는 오류 메시지가 표시되었을 수 있습니다. 이 문제를 해결하기 위해 취할 수 있는 몇 가지 단계가 있습니다. 시간이 지나면 다시 알려드리겠습니다.

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    단백질의 전달, 그리고 그것은 거의 항상 세제 내에서 불용성입니다.불완전한 세척.비특이적 아미노산이 이 타원형에 결합합니다.사용된 항체에는 부적절하게 특이적인 것으로 나타난 항체가 포함되어 있습니다.너무 큰 항체가 사용되어 결국 비특이적 결합이 되었습니다.

    이 면역 침전을 어떻게 개선할 수 있습니까?

    반복하다. 전문가가 표적 단백질 복합체가 필요하다고 주장하는 생물학적으로 관련된 샘플을 선택하십시오.면역 침전. 갓 생산된 용해물을 사용하여 단백질 복합체를 얻으십시오.단방향 Co-IP.기타 항체.양성 및 음성 대조군.분석.

    연쇄상 구균 단백질. 대부분의 포유동물 면역글로불린 G(IgG)의 Fc 불변 골격이 결합하는 2개 또는 3개의 웹사이트 이름을 포함합니다. 단백질 G는 Fc 도메인 백본의 두 번째 상수와 후속 상수 사이의 일부 개구부에 결합하며 이는 단백질 A와 거의 동일한 수준의 결합입니다. 단백질 G는 진정한 4가닥 ² 잎의 오른쪽 나선으로 구성됩니다. . 프리젠테이션에 필요한 G의 잔기는 주나선의 C-말단, 다음 가닥의 N-말단, 그리고 이들 쌍을 연결하는 부분적 고리에만 위치한다. 단백질 G: Fc 소다는 대부분 전하를 띠고 극성을 혼동하는 접촉 정보를 필요로 하는 반면, Fc와 함께 단백질 A는 비특이적 소수성 가닥 및 일부 극성 로맨틱 관계에 의해 함께 고정됩니다.

    귀하의 가족은 IP 비드를 어떻게 청소합니까?

    튜브를 원심분리하고 상층액도 볼과 함께 제거합니다.비특이적 결합을 줄이기 위해 세척 버퍼 및/또는 용해 버퍼로 적절한 비드를 전략적으로 세척합니다.가능한 한 일반 구슬에서 완벽하게 흠집이 없는 면봉을 최대한 부드럽게 떼어냅니다.

    가벼운 용출과 변성 여부에 관계없이 용출은 단백질 A 또는 단백질 G에 대해 가져온 항체 사이의 결합을 끊습니다. 강한 용리는 또한 단백질 사이의 병합을 끊습니다. , 항체 내부에 관여하는 키 및 경쇄, 따라서 항체. 젤에 클레어해야합니다. 무거운 그룹 IgG는 대략 kDa 정도이고, IgG 경쇄는 25kDa의 주제에 있으며, 전체 복합체인 IgG는 약 160kDa입니다. 노트. 가벼운 용출은 단백질 A 또는 단백질 G를 고려할 때 확실히 정기적으로 IgG의 친화력을 방해합니다. 그리고 강한 용리는 재구성 대체물이 있는 경우에만 IgG 사슬을 분해합니다.

    단백질 새로운 면역 침전 문제 해결

    일부 젤에서 항체가 필요하지 않은 경우 대부분의 사람들은 G-단백질 또는 면역 침전 전 A-단백질. 또는 구매자는 PI를 생성하기 위해 1차 항체를 사용하는 것을 방지하기 위해 이식용 항체 뒤에 다른 세트를 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 항-IP 단일클론 항체로 작업하는 것으로 입증된 경우, 우리는 내 단일클론 항체가 알아차리지 못하는 다중클론 항체로 막을 완충할 수 있습니다.

    아이템 IP 백그라운드를 낮추려면 어떻게 합니까?

    최대 1% Tween-20(비이온성 세제), 0.2% SDS(음이온성 및 세제 함량이 높은 최종 결과) 또는 1M NaCl로 추가 증가를 사용합니다. 이러한 매우 엄격한 세척과 증류수를 번갈아 사용하면 명성이나 비특이적 결합을 줄이는 데 도움이 될 수 있습니다. 육분의 하나

    마지막으로 각 Clean-Blot ™ IP 시약은 기본 It-igg만을 강조합니다. SDS-PAGE 샘플 버퍼에서 최근 변성된 IgG만 인식합니다.

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